【shbio文献】血清外泌体中的miRNA作为KD诊断biomarker

通过特定生物标志物的表达实现对疾病的诊断，是医学研究领域的热点。外泌体，一种包含了细胞特异性信息的囊泡结构，保护了内部的分子免受胞外酶类的降解。因此，通过寻找外泌体中特定的成分，寻找疾病特异性的biomarker，是当前的研究热点。通过本研究，让我们来看看表达谱miRNA芯片是怎么用于川崎病（KD）诊断biomarker的筛选和运用。

研究背景

皮肤粘膜淋巴结综合症（muco-cuta-meous lymph node syndrome，MCLS）又称川崎病（Kawasaki disease），是一种以全身血管炎变为主要病理的急性发热性出疹性小儿疾病。虽然已有的研究已经发现一些血来源的蛋白分子或者miRNA有潜在的诊断能力，但是，其有效性还有待提高。外泌体，一种包含了细胞特异性信息的囊泡结构，保护了内部的分子免受胞外酶类的降解。因此，通过检测外泌体中的遗传物质，是寻找可靠诊断biomarker的理想方式。本研究从检测血清外泌体中的miRNA入手，筛选了可用于KD特异性诊断biomarker的潜在分子。

研究结果

1. 外泌体分离与确认

通过SBI的ExoQuick试剂盒分离，研究人员得到了KD病人，正常人，和IVIG治疗后病人的血清外泌体。电镜观察与CD9, CD81 和TSG101三个marker蛋白鉴定，研究人员确认了从血清中分离出来了的外泌体分子。

2. 外泌体中KD特异性miRNA筛选

为寻找到能特异性反映KD特征的biomarker，研究人员运用miRNA表达谱芯片（伯豪生物提供），比较了外泌体中的miRNA表达差异。分析显示，miR-1260a,miR-4701-5p, miR-885-5p, miR-328 和miR-197-3p，在KD组中上调，而在IVIG治疗后又下调。

3. 外泌体中miRNA表达验证

为验证芯片结果的可靠性，研究人员对11个候选的miRNA，在其他独立的60个样本（20个健康人，20个KD病人，20个IVIG治疗病人）和5个腺病毒感染病人（ADV）进行了验证。由于目前没有外泌体中的miRNA内参基因，研究人员把每一个的表达情况与所有11个比较作为参考。结果显示，miR-1246/miR-4436b-5p在KD和正常人，IVIG治疗与KD中差异显著，在正常人和IVIG治疗中不显著；miR-197-3p/miR-671-5p则只在ADV和KD中差异显著。

3.  KD诊断biomarker模型验证

为验证上述筛选到的biomarker的有效性，研究人员用另外两个医院的样本进行了验证。这些病人包括54个健康个体，54个KD病人，10个ADV病人，13个EBV病人，12个JIA病人和1个SF病人。两个医院的病人（Centre 1和 Centre 2）的盲测结果显示，KD病人基本能和非KD病人区分开来。因此，通过检测外泌体中的上述4个miRNA的表达， 可以作为潜在的KD诊断biomarker。

小结

本研究通过筛选血清外泌体中的miRNA，运用表达谱芯片找到了KD病人特异性表达的miRNA。后期通过大量的病人样本，健康样本和其他类似疾病样本验证，表明其找到的miRNAs可以作为KD特异性的诊断指标。该研究从外泌体的角度为KD诊断提供了新的思路，作为其他疾病研究的小伙伴们，该研究还是可以参考的。

参考文献：Jia HL et al,. Sets of serum exosomal microRNAs as candidate diagnostic biomarkers for Kawasaki disease. Sci Rep. 2017 Mar 20;7:44706.